美国abraxis孔雀石绿检测试剂盒
适用
本试剂盒适用于水产品中孔雀绿的定量检测。
原理
本试剂盒原理是竞争酶联免疫检测方法，利用萃取剂从样品中提取到孔雀石绿. 在固相载体微孔板中加入标准和处理的样品，然后加入孔雀石绿抗体，反应30分钟后洗板，然后加入HRP标记的孔雀石绿孵育30分后洗板，洗涤后加入显色剂，结合的酶将无色的显色剂转化为蓝色的产物；加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色；在450nm波长进行检测，样品中的孔雀石绿浓度与吸收光强度成反比 。
特异性
与孔雀石绿类似物的交叉反应
Compound % CR
Malachite green 孔雀石绿 100%
Leucomalachite 隐色孔雀绿 1%
Crystal Violet 结晶紫 120%
Leucocrystal Violet 隐色结晶紫 2%
检测限
0.01 ppb
试剂盒组成
96孔酶标板：1块（8×12条）。
标准品贮备液（Standard）: 1瓶（0.4ml/瓶），100ppb。
酶标记物：1瓶（25倍, 0.8ml）HRP标记的孔雀石绿结合物
孔雀石绿抗体：1瓶（9ml）
底物显色液：1瓶（16ml）
终止液：1瓶（12ml 、1N HCl）。
结合物稀释液：1瓶（15ml）。
样本稀释缓冲液：2瓶（25ml）
浓缩洗涤液：1瓶（5倍， 100ml/瓶）、酶标板的洗涤。
使用说明书
操作步骤
1. 使用前将试剂盒和样品处理物提前从冰箱中拿出来使其达到室温。装有洗液的洗瓶。
2．从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。
3. 用移液器吸取75 μl 样品处理物到对应的测试孔 ，同时在每个孔中都加入75 μl 抗体溶液。
4. 轻轻震动30秒使其混匀孵育30分。
5. 孵育完成后，将微孔中的溶液倒入水槽中，用配好的洗板缓冲液清洗微孔。每孔每次至少加入250ul，微震荡洗涤后倒掉，重复三次，总共四次洗板。拍板，去掉残留的洗液。
6. 每个孔加入150 μL 酶标结合物.
7. 轻轻震动30秒使其混匀孵育30分
8. 孵育完成后，将微孔中的溶液倒入水槽中，用配好的洗板缓冲液清洗微孔。每孔每次至少加入250ul，微震荡洗涤后倒掉，重复三次，总共四次洗板。拍板，去掉残留的洗液。
9. 每个孔加入150 μL 底物.孵育30分
10. 每孔加入 100 μL 终止液.
11. 450nm 下读取每个孔的吸光度值（OD）
结果分析
1． 半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定，样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值，则说明样品的孔雀石绿含量大于此标准的浓度，样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值，则说明样品的孔雀石绿含量小于此标准的浓度。
2． 定量结果判定，需要以标准的吸光度值为X轴，标准浓度的对数为Y轴绘制曲线图，将标准浓度吸光度值的点用直线连接，样品的吸光度值也位于这条直线上，根据样品的吸光度值在Y轴上即可找到相应样品的浓度，如果样品的吸光度值大于*小标准的吸光度值或小于*大标准的吸光度值，即可说明此样品中孔雀石绿的含量小于0.01ppb或大于1ppb。
3. 当样品的浓度高于1ppb 时要调节稀释倍数来获得*终的浓度。 |
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