在涉及蛋白组学的实验中,经常需要检测溶液中的蛋白质浓度。常用的蛋白定量的方法分为两大类:一类是铜还原法,原理是在碱性环境中利用肽键将二价铜还原为一价铜,间接反映蛋白质的数量,如双缩脲反应、改良Lowry法、BCA法等;另一类是染料结合法,原理是通过染料与蛋白质的结合,使溶液的光吸收峰发生改变,从而反应蛋白质的数量,*常用的染料是考马斯亮蓝G250(Bradford法),以及一些金属-染料复合物,如儿茶酚-钼酸复合物、邻苯三酚红-钼酸复合物等。
在蛋白质提取和蛋白电泳实验中,经常会用到还原剂和去垢剂(表面活性剂),上述蛋白定量方法往往与这些还原剂和去垢剂不兼容:还原剂对铜还原法有强烈干扰作用,即使在没有蛋白的情况下也能产生显色反应,无论是样品本身含有的抗坏血酸,或是缓冲液中含有的巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)等,均能形成干扰;去垢剂则对染料结合法有强烈干扰作用,如SDS、Triton X100、Tween-20等,会与染料结合使溶液光吸收峰发生改变;高浓度的去垢剂也会对铜还原法产生干扰,但是在常用浓度下一般没有影响。这些还原剂和去垢剂在蛋白提取缓冲液和电泳相关缓冲液中很常见,传统上解决这些干扰的方法是通过蛋白沉淀法去除干扰成分,然后重悬蛋白进行浓度测定,其缺点在于显著增大了工作量,并且增加了实验误差。
Bradford法不受绝大部分样品中的化学物质的影响,也不受还原剂的影响,但是去垢剂可以造成强烈干扰。通过与染料结合,去垢剂抬高背景光吸收值,使得检测灵敏度和检测范围发生改变,甚至无法检测。本产品通过对Bradford法的改进,采用特殊配方,消除去垢剂的干扰,可兼容6% SDS、4% Tween20、2% Triton-X100、2% NP40,可耐受各种RIPA裂解液,对蛋白组学实验常用的各种缓冲液均可兼容。 |