EDTA抗凝兔血
试剂及配制
1、缓冲生理盐水:
( 1) 贮存液: Na2HPO4.12H2O 2.85g
KH2PO4 0.27g
NaCl 17.00g
蒸馏水定容至 100ml
4℃保存备用
( 2)应用液: 5ml 贮存液加 95ml 蒸馏水,再加 10%硫酸镁 0.1ml, 当日配制, 12 小时内使用。
2、2%绵羊红细胞:无菌采取绵羊血液,于等量 Alsever 液中可保存 3 周。用前以缓冲液洗 3次,并配成 2%细胞悬液。必要时可用吸光光度法或细胞计数法使悬液细胞浓度标准化。
3、溶血素:将绵羊红细胞溶血素(效价 1:4000),用应用液做 1:2000 倍稀释(即 1ml 溶血素加 1999ml 应用液)。
4、待测血清:新鲜血液室温放置 30min,再 4℃放置 60min,使血块收缩, 4℃离心( 3000r/min)10min,取上清, -20℃保存。
EDTA抗凝兔血
标本要求
1. 血清:
室温血液自然凝固10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保
存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2. 血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20
分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3.尿液:
用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀
形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4.细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。
5.培养细胞:
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。
通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左
右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6.组织标本:
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化
后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀
浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检
测,其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进
行试验 |
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