酶联免疫或化学发光免疫分析的对象包括有酶、蛋白、抗体、多肽、抗原、核酸、糖、脂质等物质，其中酶、蛋白、抗体或多肽均属于蛋白类分子，需要使用蛋白缓冲液来保护蛋白。
蛋白缓冲液的基本组成
1.生物缓冲液，包括有Tris-HCl缓冲液、Tricine缓冲液、PB磷酸缓冲液、CB碳酸缓冲液等，其中Tris的缓冲体系应用较为普遍，缓冲能力比较强，同时对蛋白有良好的溶解性，为蛋白提供合适的pH环境。
2.盐类，主要是氯化钠，调节蛋白缓冲液的离子强度（类似盐浓度）。通常配制时，需较少的离子强度防止蛋白沉淀；但需要将蛋白脱离出来时，应增加离子强度，否则蛋白难以沉淀脱离完全。对于有些蛋白，两性离子的盐类有助于蛋白结合。
3.表面活性剂：吐温20、Triton X-100等，改变缓冲溶液表面张力，增加试剂相容性。
4.有时还需要添加糖类如蔗糖、海藻糖等，惰性蛋白如Casein（酪蛋白），防腐剂如叠氮钠、卡松（异噻唑啉酮混合物）等。
蛋白缓冲液选择优化
虽然蛋白缓冲液的基本组成类似，不过没有通用的缓冲液，不同的系统必须分别优化。不同的蛋白其合适的pH值、亲水性、溶解性、稳定性都有差异。另外，蛋白在缓冲液中越不稳定，蛋白结合力越强。当缓冲液pH与蛋白等电点相同时，蛋白*不稳定，容易聚集沉淀。
蛋白缓冲液的稳定作用
蛋白缓冲液中添加有糖，对包被蛋白的稳定性有重要作用，减缓蛋白老化作用，并增加亲水性；添加的表面活性剂也是增加蛋白的亲水性，惰性蛋白也具有保护作用。在蛋白结合包被步骤中，需用沉淀剂（醇）降低蛋白的稳定性，也可润湿膜，减少膜带有的静电。
这里的蛋白在缓冲液中的稳定与不稳定是特定的，改变缓冲液的部分条件以优化不同的蛋白处理步骤，前提都是不能使蛋白变性或失活。德晟是生物缓冲剂厂家，生产有Tris、Bicine、MOPS等多种缓冲剂。 |
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