GST pull down实验原理●
GST pull down是将GST融合蛋白作为探针固化到凝胶柱上，与溶液中的目的蛋白相结合。可用来确定融合（或探针）蛋白与未知（或靶）蛋白间的新的相互作用。先将体外表达的GST融合蛋白结合到谷胱甘肽Beads上，再将靶蛋白-GST-Beads和细胞裂解液孵育，这样互作蛋白便一起吸附在Beads上。
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常见的蛋白相互作用方法主要有免疫共沉淀（Co-IP）、pull down、酵母双杂交、荧光双分子互补（BiFC）、荧光共定位等。
pull down技术将目标蛋白进行体外原核表达，使标签蛋白（GST或His等）与目标蛋白融合表达，借助标签的亲和介质将目标蛋白纯化出来，可以不受抗体、物种限制，比较轻松的获得目标蛋白的结合蛋白，还可以通过外源同时表达目标蛋白和待测蛋白，确定它们是否发生直接的相互作用，
Co-IP技术采用目标蛋白的抗体捕获样本中的目标蛋白及其互作蛋白复合物，反应的是体内真实的生理结合，但是不能显示这些相互作用是直接还是间接的；另外合适的免疫共沉淀抗体是决定实验成功的关键，有些蛋白没有可用的IP抗体，无法进行内源性Co-IP实验；
荧光双分子互补（BiFC）技术将目标蛋白和待测蛋白分别与GFP的两个片段融合表达，转染细胞后，2个蛋白的结合使得GFP两个片段空间上靠近，从而发出绿色荧光，该技术观测直观，操作简便，但空间分辨率大约 250nm，对于蛋白质相互作用来说依然是个相当远的距离，因此位置上靠近但并未结合的蛋白也可能显示阳性结果，假阳性率较高；另外该技术可以验证蛋白间的相互作用，但不能筛选未知互作蛋白。
荧光共定位技术依靠荧光确定蛋白质具有相同定位，用于辅助证明而非直接证明细胞内蛋白间的相互作用。
以上方法通常相互补充，多种方法共同确定蛋白质间的相互作用，也能更大程度的 |
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