蛋白质测定仪测定中铁轻化加浓度对精度影响
流速的选择化学发光流动注射体系中,流速太慢会导致*大发光信号出现在进入流通池之前;流速太快会导致*大发光信号出现在进入流通池之后,都不能被光电倍增管完全检测。蛋白质含量的测定可以使用蛋白质测定仪进行快速的测定分析。
选择载流、试样的流速为5.0mL?min-1,鲁米诺与铁轻化加的流速为4.0mL?min-1。鲁米诺浓度的选择在卵清白蛋白-鲁米诺-铁轻化加和牛血清白蛋白-鲁米诺-铁轻化加两体系中,当鲁米诺的浓度在2.0×10-6~8.0×10-5mol?L-1范围,随着浓度的增加,两体系的相对发光强度也增大,但当鲁米诺浓度超过5.0×10-5mol?L-1时,相对发光强度均降低。鲁米诺浓度为5.0×10-5mol?L-1时,峰形好,信噪比(S/N=3)*佳。选择鲁米诺浓度为5.0×10-5mol?L-1。使用自动定氮仪分析发下铁轻化加浓度的选择试验结果表明:铁轻化加浓度为6.0×10-4mol?L-1时相对发光强度达到*大;随后铁轻化加浓度继续增大,蛋白质发光体系的相对发光强度反而降低。试剂pH值的选择试验结果表明:铁轻化加与鲁米诺的酸度对发光体系的相对发光强度都有明显的影响,在pH为12.0和pH为12.2时,卵清白蛋白和牛血清白蛋白的发光强度和信噪比(S/N=3)达到*大。试样pH值的选择试验结果表明:卵清白蛋白和牛血清白蛋白在pH9.0~12.2,pH9.0~12.5范围内,体系的相对发光强度随着试样溶液的pH值升高而增大;随后试样的pH增大相对发光强度反而降低,而且噪音增大峰形变差。选择试样溶液的pH分别为12.2和12.5。增敏剂的选择试验结果表明:聚乙二醇辛基苯基醚的加入使反应的相对发光强度降低;溴化钾和β-环糊精能明显增强鲁米诺-铁轻化加体系相对发光强度,但对蛋白质-鲁米诺-铁轻化加无协同增强作用;十二烷基磺酸钠、三氯甲烷、乙醇、甲醇、乙腈等均未显示出明显的协同催化效果,溴化十六烷基三甲基胺对该体系的发光具有明显增强作用。试验选择5.0×10-5mol?L-1溴化十六烷基三甲基胺溶液。
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