孔雀石绿ELSIA试剂盒的检测时间为75min,灵敏度0.1ppb,样品处理不需氮吹，使用方便。
一、原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中孔雀石绿的残留量。
二、适用范围
定量检测鱼虾、水样中孔雀石绿的残留。
三、试剂盒特点及技术指标
* 检 测 时 间 ： 75min
试剂盒灵敏度： 0.1ppb(μg/kg)
* 试剂盒检测纯阴性样本的背景值＜0.3 ppb；
* 样品处理方法无需氮吹，节省了人力物力；
* 试剂盒提供近工作浓度标准品，使用方便。
试剂盒检测样本的灵敏度和准确度：
样本 检测下限 回收率
虾、鱼 1ppb 70%-120%
水样 0.5 ppb 70%-120%
药物名称 交叉反应率（%）
孔雀石绿 100%
隐性孔雀石绿 <1%
结晶紫 70%
隐性结晶紫 <1%
试剂盒特异性：
四、所需材料
仪器：微孔板酶标仪450 nm/630 nm、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管（10 mL）、天平（感量0.01 g）、离心管（5 mL, 50 mL）
微量移液器：单道 1μL～10 μL、10 μL～100μL
多道 50μL～300μL
试剂：乙腈、去离子水
五、 试剂盒组成
序号 组成部分 96T装量
1 孔雀石绿酶标板 12×8孔
2 10×孔雀石绿标准品*6 6×1 mL
3 隐性孔雀石绿高浓度标品1ppm 0.5mL
4 孔雀石绿酶标物 13 mL
5 孔雀石绿抗体 7mL
6 底物液A液 7 mL
7 底物液B液 7 mL
8 终 止 液 7 mL
9 10×浓缩洗涤液 40 mL
10 10×孔雀石绿样品稀释液 12 mL
11 孔雀石绿样品提取液 40mL
*注：6个10×标准品浓度为：0 ppb, 1 ppb, 3 ppb, 9 ppb, 27ppb, 81 ppb，稀释10倍使用，现配现用，配后避光放置并于半小时内使用，具体见溶液配制。
六、 酶标免疫测定程序
将所需试剂从冷藏环境中取出，待其完全回 升至室温（20～25℃）后方可使用。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
按标准品和样品双孔平行的数量使用微孔。
加标准品/样品、抗体：加标准品/样品50μL
到对应的微孔中，再加入孔雀石绿抗体50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃反应30min。
洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，
加入洗涤工作液250μL/孔，每次静置20s，甩去孔内液体，重复洗涤3次，*后一次用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
加酶标物：加入孔雀石绿酶标物100μL /孔，
轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃反应30min，甩干孔内液体，重复洗板3次，拍干。
显色：加入底物液A液50μL/孔，再加底物
液B液50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃反应15min。
测定：加入终止液50μL/孔，用酶标仪立即 测定450nm处的吸光度值（建议用双波长450/630nm）检测。
七、 结果判定
以标准品百分吸光率为纵坐标，以孔雀石绿标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中孔雀石绿实际浓度。（详见试剂盒专业分析软件，以便进行大量样本的分析计算。）
八、 注意事项
① 洗板拍干后应立即进行下一步操作。
② 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
③ 不使用过了有效期的试剂盒，不交换使用不同批号的试剂。
④ 0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15～20min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到30min，反之则减短反应时间。
九、贮藏条件及保存期
贮藏条件： 2～8℃
保 质 期： 12个月 |
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