简介
miRNA（microRNA）是一类近几年在真核生物中发现的一类具有调控功能的非编码RNA，长度约20-24个核苷酸，是发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，主要参与基因转录后水平的调控。近来发现它们在果蝇的细胞增殖、死亡及脂肪代谢，线虫极性的形成，哺乳动物的造血干细胞的分化等过程中起了重要的调控作用。在植物中，miRNA还参与了叶子与花的发育过程。动物（尤其是人）miRNA的生物合成过程已经初步阐明：首先，miRNA基因的初级转录产物（pri-miRNA）在细胞核中被RNaseIII Drosha切割成为前体miRNA（pre-miRNA），在最初的剪切后，pre-miRNA在转运蛋白exportin-5的作用下由核内转到胞质中，然后由另一种RNaseIII Dicer进一步切割产生成熟的miRNA。这些成熟的miRNA与其他蛋白质一起组成RISC（RNA-induced silencing complex）复合体，从而引起靶mRNA的降解或者翻译抑制。
miRNA过表达慢病毒服务流程
实验流程
优势
pre-miRNA策略
合成pre-miRNA构建到含有mir30侧翼双臂序列的慢病毒过表达载体
直接合成，免去基因调取流程，易于通量化
pri-miRNA策略
从基因组中调取pri-miRNA后构建到慢病毒过表达载体
保存miRNA天然双臂
miRNA抑制慢病毒服务
miRNA抑制剂(miRNA inhibitor)表达后则高效、特异地结合细胞内成熟的靶miRNA，形成稳定的复合物，阻止了miRNA对靶标mRNA的降解或者翻译抑制，上调miRNA靶标基因的表达。
实验流程
优势
SiRNA抑制
采用U6或H1之类的POL III启动子驱动抑制miRNA片段。
直接合成，免去基因调取流程
MiRNA
Sponge
采用串联的多个miRNA互补序列形成吸附“海绵”
高效，可实现组织特异性表达
辉骏载体列表
miRNA载体
载体骨架元件
应用
FT301
CMV-RFP-MCS-EF1-PURO
miRNA过表达
FT302
CMV-MCS-EF1-PURO
miRNA过表达
FT303
U6-MCS-CMV-EGFP
miRNA抑制
FT304
CMV-GFP-H1-MCS
miRNA抑制
注：此列表为常用miRNA载体样板，更多载体骨架要求请咨询客服。可根据客户要求做启动子或者标签改造，个性化定制！ |
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